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上海研域?yàn)槟v述：樣品蛋白的提取和定量
發(fā)布時(shí)間： 2018-12-21 點(diǎn)擊次數(shù)： 1345次上海研域今天為您講述：樣品蛋白的提取和定量
方法一：采取Tris-丙酮法進(jìn)行蛋白提取，
方法如下：
（1）取0.5ɡ鮮葉放入用液氮預(yù)冷的研缽中，加入適量液氮后迅速將其磨成粉末。
（2）加入0.25ɡ水不溶性PVP，加入4倍鮮葉體積即2ml蛋白提取緩沖液 充分研磨。
（3）4℃下45min，后離心（4℃，15000g,15min）
（4）取上清液加入2.5倍即5ml -20℃預(yù)冷的丙酮，-20℃下靜置45min，之后同上離心，取沉淀在-20℃下靜置揮去丙酮。
（5）加入1ml上樣液（12.5% ，0.5mol/L Tris-HCL PH6.8），沉淀充分溶解后，同上離心，取上清液即為待測蛋白溶液。
方法二：
取1～2g茶鮮葉加入等量PVPP和少量石英砂，液氮研磨，加入pH 7.4的PBS緩沖液繼續(xù)研磨直至勻漿，15000 g、4℃離心15 min，上清液即為粗酶液。
粗酶液放于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。蛋白定量采用G-250法（Bradford法）進(jìn)行。